Thrombin peptide TP508

Odczynnik chemiczny przeznaczony wyłącznie do badań laboratoryjnych (Research Use Only). Nie jest produktem leczniczym, suplementem diety ani środkiem spożywczym. Nie jest przeznaczony do stosowania u ludzi ani zwierząt. Sprzedaż wyłącznie dla zarejestrowanych jednostek badawczych i laboratoriów.

Trombina kojarzy się jednoznacznie z krzepnięciem krwi — to enzym, który przecina fibrynogen, buduje siatkę fibryny i domyka skrzep. Mało kto pamięta jednak, że ta sama cząsteczka pełni drugą, znacznie mniej oczywistą funkcję: aktywuje receptory na powierzchni komórek śródbłonka, fibroblastów i osteoblastów, uruchamiając kaskady związane z gojeniem ran, angiogenezą i naprawą tkanek. To właśnie ta „naprawcza” rola trombiny — całkowicie niezależna od krzepnięcia — stała się punktem wyjścia dla projektu TP508.

TP508 (Thrombin Peptide 508, Rusalatide, Chrysalin) to syntetyczny 23-aminokwasowy peptyd odwzorowujący domenę trombiny wiążącą receptor. Cząsteczka aktywuje sygnalizację receptora trombiny bez jakiejkolwiek aktywności proteolitycznej — nie przecina fibrynogenu, nie tworzy skrzepu, nie uruchamia kaskady krzepnięcia. Dla badacza oznacza to narzędzie pozwalające izolować regeneracyjne ramię działania trombiny od jej funkcji prokoagulacyjnej — i badać gojenie ran, rewaskularyzację oraz reparację kości w oderwaniu od krzepnięcia.

Niniejszy odczynnik dostarczany jest jako liofilizat w fiolce, do rekonstytucji wodą bakteriostatyczną w warunkach laboratoryjnych. Czystość weryfikowana metodą HPLC ≥98%, tożsamość potwierdzona spektrometrią masową Q-TOF, COA dostępne dla każdej partii.

Status regulacyjny

TP508 (Rusalatide acetate, Chrysalin) przeszedł badania kliniczne faz I, II i III w gojeniu złamań dystalnego promienia i owrzodzeń stopy cukrzycowej, jednak — z powodu mieszanych wyników skuteczności — nie uzyskał rejestracji jako lek w UE, USA ani gdziekolwiek na świecie. Brak autoryzacji EMA i FDA. Brak autoryzacji EFSA jako składnika suplementu diety. Komunikacja produktu jako „peptydu na gojenie”, „wsparcia regeneracji dla sportowców po kontuzji” lub „peptydu przyspieszającego zrost złamań” dla ludzi jest sprzeczna z ramą Research Use Only.

Trombina nie działa na komórki przez bierne wiązanie. Aktywuje je przez rodzinę receptorów aktywowanych proteazą (PAR — protease-activated receptors), głównie PAR-1 i PAR-4 na komórkach śródbłonka, płytkach krwi, fibroblastach i osteoblastach. Mechanizm aktywacji jest nietypowy: enzymatyczna trombina przecina N-końcowy fragment receptora PAR, odsłaniając nowy koniec łańcucha, który zawija się i pełni funkcję „uwięzionego liganda”, pobudzając receptor od wewnątrz.

To klasyczna, proteolityczna ścieżka aktywacji — i jest ona nierozerwalnie spleciona z aktywnością krzepnięcia trombiny. Problem badawczy jest oczywisty: jeśli chcesz badać wpływ sygnalizacji trombiny na gojenie tkanek, użycie pełnej, enzymatycznej trombiny „zanieczyszcza” eksperyment kaskadą krzepnięcia — powstaje skrzep, aktywują się płytki, uruchamia się fibrynoliza. Sygnał regeneracyjny tonie w odpowiedzi prokoagulacyjnej. Potrzebne jest narzędzie, które pobudza komórkową odpowiedź naprawczą trombiny, ale omija jej aktywność enzymatyczną.

TP508 to właśnie takie narzędzie. Peptyd odpowiada fragmentowi 508-530 ludzkiej protrombiny — regionowi cząsteczki, który uczestniczy w rozpoznaniu receptora, lecz sam nie ma aktywności katalitycznej (nie zawiera centrum aktywnego proteazy serynowej). TP508 wiąże się z domeną receptora i aktywuje sygnalizację komórkową, nie przecinając fibrynogenu ani receptora PAR w sposób enzymatyczny. To rozdzielenie obu funkcji — aktywacja sygnału naprawczego bez krzepnięcia — czyni z TP508 modelowy ligand do badania nie-proteolitycznego ramienia sygnalizacji trombiny.

W szerszej grupie odczynników badawczych mieści się on wśród peptydów na regenerację, których wspólnym mianownikiem jest pobudzanie komórkowych szlaków naprawy tkanek.

Pod względem chemicznym TP508 to syntetyczny, średniej długości peptyd liniowy odwzorowujący fragment ludzkiej protrombiny.

• Nazwa zwyczajowa: TP508, Thrombin Peptide 508, Rusalatide
• Synonimy: Rusalatide acetate, Chrysalin, TP-508, Thrombin-derived peptide 508
• Klasa: syntetyczny 23-aminokwasowy peptyd odpowiadający domenie trombiny wiążącej receptor (fragment 508-530 ludzkiej protrombiny); nie-proteolityczny agonista sygnalizacji receptora trombiny (aktywuje szlak receptorowy bez aktywności krzepnięcia)
• Sekwencja (23 aa): Ala-Gly-Tyr-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val (sekwencja do weryfikacji w COA partii)
• Numer CAS: 137913-91-2 (przy niepewności — „do weryfikacji w COA partii”)
• Masa cząsteczkowa: ~2310 g/mol (peptyd 23-aa; dokładna masa do weryfikacji w COA partii)
• Klasa chemiczna: liniowy oligopeptyd, fragment domeny receptor-wiążącej protrombiny
• Postać dostarczana: liofilizat w fiolce, do rekonstytucji wodą bakteriostatyczną; pharmaceutical grade ≥98% HPLC

Pochodzenie: TP508 został opracowany przez Chrysalis BioTechnology, a następnie rozwinięty przez OrthoLogic Corp. (później Capstone Therapeutics) jako kandydat na lek wspomagający gojenie tkanek. Punktem wyjścia była obserwacja, że trombina — poza krzepnięciem — stymuluje proliferację komórek śródbłonka, migrację fibroblastów i aktywność osteoblastów, a więc procesy centralne dla gojenia ran i reparacji kości. Mapowanie cząsteczki trombiny pozwoliło wyodrębnić region odpowiedzialny za wiązanie receptora (fragment 508-530), niezależny od centrum katalitycznego enzymu.

Na tej podstawie zsyntetyzowano TP508 — peptyd reprodukujący sygnał receptorowy bez aktywności proteolitycznej. Compound przeszedł następnie badania kliniczne faz I, II i III w kilku wskazaniach: gojeniu złamań dystalnego promienia (fracture repair), owrzodzeniach stopy cukrzycowej (diabetic foot ulcers) oraz gojeniu ran, a w późniejszych modelach przedklinicznych badano go także jako kandydata na radioprotektant (ochrona przed uszkodzeniem popromiennym).

TP508 działa jako nie-proteolityczny agonista sygnalizacji receptora trombiny. Sygnał inicjowany jest na poziomie receptorowym, a następnie rozchodzi się po kilku równoległych szlakach komórkowych obserwowanych w modelach przedklinicznych — związanych z gojeniem ran, angiogenezą i reparacją kości. Profil farmakologiczny obserwowany w modelach przedklinicznych:

1. Nie-proteolityczna aktywacja sygnalizacji receptora trombiny — TP508 odwzorowuje domenę trombiny wiążącą receptor i aktywuje komórkowe szlaki sygnalizacyjne związane z trombiną, bez aktywności katalitycznej proteazy serynowej. Peptyd nie przecina fibrynogenu i nie inicjuje kaskady krzepnięcia — nie tworzy skrzepu. To główne rozróżnienie wobec natywnej, enzymatycznej trombiny i fundament całej koncepcji tego odczynnika (Norfleet et al.)
2. Angiogeneza i rewaskularyzacja — w modelach gojenia obserwowano stymulację proliferacji i migracji komórek śródbłonka oraz wpływ na ekspresję czynników proangiogennych (m.in. szlak VEGF), prowadzący do tworzenia nowych naczyń krwionośnych w obszarze uszkodzenia. Rewaskularyzacja jest warunkiem skutecznego gojenia tkanek niedokrwionych
3. Gojenie ran i regeneracja tkanek miękkich — w modelach ran (w tym owrzodzeń cukrzycowych) TP508 sprzyjał reepitelializacji, migracji fibroblastów i odbudowie macierzy zewnątrzkomórkowej; obserwacje te leżały u podstaw badań klinicznych w owrzodzeniach stopy cukrzycowej (Fife et al.)
4. Reparacja kości i gojenie złamań — w modelach złamań (szczur, królik) obserwowano stymulację aktywności osteoblastów i przyspieszenie konsolidacji złamania; ten kierunek był podstawą badań klinicznych w gojeniu złamań dystalnego promienia (Ryaby et al.)
5. Działanie przeciwzapalne i ochrona przed uszkodzeniem niedokrwiennym / popromiennym — w modelach przedklinicznych badano wpływ TP508 na ograniczenie uszkodzenia tkanek w warunkach niedokrwienia oraz jako kandydata na radioprotektant, gdzie obserwowano ochronę śródbłonka naczyniowego i tkanek przed uszkodzeniem popromiennym (Olszewska-Pazdrak et al.)

TP508 wśród ligandów sygnalizacji trombiny — pozycja farmakologiczna: W badaniach nad sygnalizacją receptora trombiny stosuje się kilka strategii oddzielenia odpowiedzi komórkowej od aktywności krzepnięcia. TP508 reprezentuje podejście oparte na fragmencie naturalnej domeny wiążącej:

• Trombina natywna (enzymatyczna) — pełna aktywność proteolityczna i receptorowa razem; nieprzydatna do izolowania samej sygnalizacji naprawczej, bo uruchamia krzepnięcie i aktywację płytek
• Syntetyczne peptydy aktywujące receptor (TRAP — thrombin receptor activating peptides) — krótkie peptydy odwzorowujące „uwięziony ligand” odsłaniany po proteolitycznym cięciu PAR-1; aktywują receptor PAR-1, lecz reprezentują inny mechanizm niż domena wiążąca trombiny
• TP508 / Rusalatide — 23-aa fragment domeny trombiny wiążącej receptor (508-530); nie-proteolityczny agonista sygnalizacji naprawczej, badany pod kątem angiogenezy, gojenia ran i reparacji kości bez aktywności prokoagulacyjnej

TP508 wykorzystywany jest w pracach badawczych nad nie-proteolitycznym ramieniem sygnalizacji trombiny oraz jego rolą w gojeniu ran, angiogenezie i reparacji tkanek. W modelach in vivo (szczur, mysz, królik — modele złamań, ran cukrzycowych, uszkodzenia niedokrwiennego i popromiennego) bada się jego wpływ na konsolidację złamania, reepitelializację, gęstość unaczynienia i markery zapalne. W modelach in vitro (hodowle komórek śródbłonka, osteoblastów, fibroblastów) prowadzi się badania sygnalizacji receptorowej, proliferacji, migracji komórek oraz ekspresji czynników proangiogennych. Konkretne kierunki badawcze obejmują:

• Gojenie złamań i reparacja kości — modele złamań dystalnego promienia i kości długich; ocena konsolidacji, aktywności osteoblastów i mechaniki zrostu
• Gojenie ran i owrzodzenia cukrzycowe — modele ran przewlekłych i owrzodzeń stopy cukrzycowej; ocena reepitelializacji, migracji fibroblastów i odbudowy macierzy
• Angiogeneza i rewaskularyzacja — hodowle komórek śródbłonka, modele unaczynienia; badania proliferacji, migracji i ekspresji VEGF
• Sygnalizacja receptora trombiny — charakterystyka nie-proteolitycznej aktywacji szlaku, porównanie z aktywnością enzymatycznej trombiny i syntetycznymi peptydami TRAP
• Radioprotekcja i ochrona przed uszkodzeniem niedokrwiennym — modele uszkodzenia popromiennego i ischemii; ocena ochrony śródbłonka i tkanek

TP508 bywa też zestawiany w protokołach badawczych z innymi peptydami regeneracyjnymi i tkanko-protekcyjnymi — np. BPC-157 PEN (szlak VEGF/FAK, angiogeneza) czy ARA-290 (innate repair receptor, działanie przeciwzapalne) — gdy celem jest porównanie różnych mechanizmów naprawy tkanek. Każde takie zestawienie pozostaje w ramie modeli przedklinicznych. Gdy badany jest profil odczynników po urazach tkanek miękkich, TP508 sytuuje się obok innych peptydów na gojenie wykorzystywanych w modelach reparacji.

STATUS REGULACYJNY

TP508 (Rusalatide acetate, Chrysalin) nie jest zarejestrowany jako lek w UE ani USA — compound zakończył badania kliniczne faz I–III bez rejestracji rynkowej (mieszane wyniki skuteczności). Kwestia WADA wymaga uwagi: TP508 nie figuruje wprost na Liście Zabronionej WADA jako wymieniona z nazwy substancja, jednak jako peptyd o profilu proangiogennym i growth-factor-like może podlegać interpretacji w ramach szerokich kategorii (m.in. czynniki wpływające na angiogenezę / sekcja S2). Sportowcy zarejestrowani (ADAMS) powinni samodzielnie weryfikować aktualną Listę Zabronioną WADA przed jakąkolwiek decyzją i nie zakładać, że status peptydu jest jednoznaczny.

TP508 (Thrombin Peptide 508, Rusalatide, Chrysalin) to syntetyczny 23-aminokwasowy peptyd odwzorowujący domenę trombiny wiążącą receptor (fragment 508-530 ludzkiej protrombiny), opracowany przez Chrysalis BioTechnology i rozwijany przez OrthoLogic / Capstone Therapeutics. Peptyd aktywuje komórkowe szlaki sygnalizacyjne związane z trombiną — angiogenezę, gojenie ran i reparację kości — bez aktywności proteolitycznej: nie przecina fibrynogenu i nie tworzy skrzepu, co odróżnia go od natywnej, enzymatycznej trombiny.

W modelach przedklinicznych obserwowano stymulację proliferacji komórek śródbłonka i ekspresji VEGF, reepitelializację, migrację fibroblastów oraz aktywność osteoblastów, a compound przeszedł badania kliniczne faz I–III w gojeniu złamań dystalnego promienia i owrzodzeniach stopy cukrzycowej — z mieszanymi wynikami i bez rejestracji jako lek. Status regulacyjny — wyłącznie Research Use Only; brak rejestracji jako lek; WADA: nie figuruje wprost, ale profil proangiogenny wymaga weryfikacji aktualnej listy przez zarejestrowanych sportowców.

1. Ryaby JT, Sheller MR, Levine BP, Bramlet DG, Ladd AL, Carney DH (2006). Thrombin peptide TP508 stimulates cellular events leading to angiogenesis, revascularization, and repair of dermal and musculoskeletal tissues. PubMed
2. Fife C, Mader JT, Stone J, Brill L, Satterfield K, Norfleet A, Zwernemann A, Ryaby JT, Carney DH (2007). Thrombin peptide Chrysalin stimulates healing of diabetic foot ulcers in a placebo-controlled phase I/II study. PubMed
3. Norfleet AM, Bergmann JS, Carney DH (2000). Thrombin peptide, TP508, stimulates angiogenic responses in animal models of dermal wound healing, in chick chorioallantoic membranes, and in cultured human aortic and microvascular endothelial cells. PubMed
4. Olszewska-Pazdrak B, Carney DH (2013). Systemic administration of thrombin peptide TP508 enhances VEGF-stimulated angiogenesis and attenuates effects of chronic hypoxia. PubMed
5. Carney DH, Olszewska-Pazdrak B (2008). Could rusalatide acetate be the future drug of choice for diabetic foot ulcers and fracture repair?. PubMed